Varios Procesos Para Corregir Las Manchas De Cebador En La Recuperación De Errores De PCR

• Minimización de roturas de ADN y roturas durante la eliminación. Si es necesario, evalúe la plantilla de ADN mediante electroforesis de base de integridad.
• Almacene el ADN en funcionamiento en agua molecular o tampón TE 8-10 (ph.0) para evitar la degradación debido a las nucleasas.

• Siga estrictamente las recomendaciones del fabricante cuando utilice el kit de limpieza para extracción de ADN Plantilla . Consulte la guía para fumadores y la guía de solución de problemas para disminuir el ADN de baja calidad.
• Asegúrese de que cuando use cualquier químico y/o siga los protocolos de purificación de ADN enzimático según sea necesario, prometa que no hay inhibidores de PCR residuales como fenol, l-EDTA y proteinasa K.
• Vuelva a purificar el ADN por medio de etanol al 70 % o precipite y purifique el ADN para eliminar las sales ocultas o (por ejemplo, iones, por ejemplo, K⁺, Na ⁺, etc.) que inhiben muchas ADN polimerasas.
• Elija ADN polimerasas de procesividad avanzada que muestren alta tolerancia en lugar de inhibidores de PCR convencionales que se encuentran entre el cultivo, el suelo, los tejidos vegetales, etc.< /li>

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• Verifique la cantidad de ADN inyectado y mejore la cantidad en dólares si es necesario.
• Seleccione las ADN polimerasas que tengan la mayor sensibilidad de amplificación.
• Aumente la cantidad total si es necesario ciclos de PCR.

• Elija ADN polimerasas con una procesividad superior que muestren una alta afinidad como estilos de ADN y mejor x se adapte a usted para mejorar los objetivos molestos. Use un aditivo de PCR, también conocido como codisolvente, para ayudar a las secuencias ricas en ADN y GC. Habilidad y desnaturalización del ADN y las estructuras secundarias.
• Aumente la cantidad de tiempo de desnaturalización y/o separe las plantillas del ADN de doble cadena en su clima -manera amigable.< /li>

• Verifique el espacio de sonido permitido de la polimerasa seleccionada genética. Use polimerasas de ADN especialmente diseñadas para PCR increíblemente largas.
• Elija polimerasas de ADN con alta procesividad, pueden amplificar trabajos largos en menos tiempo.
• Reducir la temperatura de recocido y la elongación podría ayudar en los cebadores , unión a enzimas y estabilidad térmica.
• Aumento del tiempo total de elongación en función de la longitud del amplicón.

• Revise lo esencial del diseño. Utilice las herramientas de innovación en línea del gobierno federal adecuadas,
• asegúrese de que todos los cebadores coincidan con el objetivo de todos los intereses.
• Asegúrese de que los cebadores sean complementarios a todas las hebras correctas involucradas con el ADN objetivo.

• Los imprimadores se dividen en alícuotas y se almacenan correctamente, generalmente después de la resuspensión.
• Restaurar alícuotas frescas del gobierno federal u obtener nuevas si normalmente se necesitan cebadores.

• Concentraciones de Optimize 101 (generalmente en el rango de 0.1-1 µM cada una).
• Para PCR largas , y para PCR con cebadores de giro, comience con una concentración mínima de 0,5 μM.
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• Usar sobre el ADN de arranque en caliente para detectar la degradación aparente unida a los cebadores d corrigiendo la actividad deportiva en 3’≤5′ ADN polimerasa exonucleasa. Las polimerasas de ADN de inicio en caliente aumentan de manera similar el rendimiento de las PCR seleccionadas con productos que eliminan la amplificación no específica.
• También puede programar la PCR en hielo o agregar la última polimerasa de ADN a la mezcla de reacción.

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• Elija polimerasas de ADN con excelente sensibilidad al considerar la amplificación.

< li > Reconsiderar Usar la dosis recomendada entre la ADN polimerasa en las tendencias de PCR y optimizar dentro de lo necesario.

• Aumentar la cantidad de ADN polimerasa si la mezcla de impacto contiene una alta concentración de un aditivo (p. ej., DMSO, formamida) o inhibidores de la muestra de cualquier fuente.