Table of Contents
다음은 미생물 변형 문제를 해결하는 데 도움이 될 수 있는 몇 가지 요점 단계입니다.
PC가 느리게 실행되나요?
박테리아 변형 단계 발달 기술, DNA를 세포 바닥에 결합, 유리 DNA의 처리 및/또는 흡수(보통 꽤 많은 ‘5’에서 특정 방향으로) 등. 재조합에 의해 이 특정 염색체에 DNA의 통합.
세균의 형질전환은 분자생물학 실험실에서 아주 정상적인 과정일 수 있습니다. 유능한 쌍을 이루는 대장균 물질로 ligation 반응을 수행하고 메뉴의 각 세포를 플레이팅한 후 다음 날 모든 플레이트에 적합한 많은 수의 콜로니가 형성되기를 기다리기만 하면 됩니다.
그러나 집락이 없거나, 포화된 집락이 있거나, 두드러기가 너무 많다는 점에서 컵과 관련된 일반적인 문제에 지속적으로 직면하게 될 것입니다. 이는 우수한 박테리아 형질전환에 투자할 몇 가지 요소와 사후 조정 문제를 해결하기 위한 몇 가지 더 빠른 문제 해결 정보를 제공합니다.
성공적인 변환에 거의 항상 영향을 미치는 요소는 무엇입니까?
사실 왜 내 변환 효율성이 그렇게 낮습니까?
효율성에 영향을 미치는 요인은 박테리아 균주, 박테리아 콜로니의 증가 단계, 형질전환 혼합물로 인한 구성, 외래 DNA의 크기 및 시나리오입니다.
1 적격 세포의 박테리아 형질전환 효율
형질전환 효율이 낮은 유능한 매우 작은 세포는 플라크가 자라면서 집락을 거의 형성하지 않을 수 있습니다. 재구성 효율을 계산하려면 pUC19와 같은 승인된 농도에서 절단되지 않은 플라스미드를 사용하여 효과적인 세포를 변환하십시오.
전환 효율 계산 방법
변환 효율성이 없습니다. 1 μg의 플라스미드 DNA를 일종의 주어진 절대 부피의 유능한 세포로 전환하여 얻은 콜로니 형성 단위.
모든 예에서와 같이 강력한 SR은 1μL(10pg 대 μL)의 pUC19를 GoldBio DH10B 화학적으로 적합한 세포에 속하는 25μL로 전환했습니다.
그런 다음 975μL의 회수 시스템을 튜브에 추가했습니다. 그들은 990μl 추출물에 10μl를 희석하고 200μl의 희석 배지를 분배했습니다.
다음 날 당신은 스택에 있는 250개의 식민지를 언급했습니다.
<울>
이와 같은 작은 플라스미드 각각에 대해 pUC19, 5.0 CFU/μg 10 ten 은 상대적으로 높은 ET입니다. 따라서 이러한 적합한 셀은 매우 효율적입니다.
적합한 세포의 효율성 변환을 계산하는 방법에 대한 자세한 내용은 아래 GoldBio 비디오를 참조하십시오.
두 번째 플라스미드
형질전환에 사용된 플라스미드는 적응 효과에 영향을 미칠 수 있습니다. 예를 들어, 넓은 플라스마를 사용한 형질전환 효율은 일반적으로 이 작은 플라스미드에 의한 효율보다 낮습니다. 거대 플라스미드를 형질전환하기 위해 적합한 세포 물질의 올바른 선택과 그에 따른 전기천공 기술은 형질전환 효율을 증가시켜야 할 때 도움이 될 수 있습니다.
필요한 또 다른 요소는 DNA 농도를 프로토콜에서 권장하는 농도와 비교하는 것입니다. GoldBio DH10B Chemically Competent Cellular Structure에 대한 프로토콜 버전에 따라, 형질전환을 위한 권장 DNA 양은 1pg에서 100ng의 DNA입니다. 따라서 적어도 1μg의 DNA를 포함하는 1μl의 결찰 반응이 이러한 세포를 형질전환하는 데 사용될 수 있습니다.
세 번째 배양 배지
형질전환된 박테리아는 점진적인 기후 충격이나 전기 펄스 주파수를 사용하여 벽이나 특정 벽에 작은 구멍을 만들었습니다. 따라서 그들은 이러한 플라스미드 DNA를 쉽게 “포착”할 수 있습니다. 이 침입에서 회복하기 위해 세포는 SOC와 같은 영양이 풍부한 환경에서 실제로 살고 성장합니다.
이에 대한 자세한 내용은 말 그대로 환상적인 미디어입니다. 아래의 GoldBio 기사를 읽으십시오.
SOC 환경 및 컴피턴트 셀 복구 환경 요약
네 번째 온도
온도는 주로 화학적으로 전문적인 세포의 형질전환에서 박테리아 형질전환에 중요한 역할을 합니다.
예를 들어, 화학적 컴피턴트 GoldBio DH10B 세포에 대한 열 충격 단계는 점진적 처리가 필요합니다. 5초 및 다시 0°C에서 2분 동안 유지합니다. 이 프로세스 쓰기의 잘못된 단계는 변환 결과에 영향을 줄 수 있습니다.
형질전환 직후, 형질전환된 세포는 37°C에서 성장하는 데 도움이 되는 워밍업이 필요합니다. 이를 수행하는 한 가지 방법은 자체 쉐이킹 인큐베이터를 사용하는 것입니다. 이 인큐베이터는 또한 영양 배지의 모든 세포에 영양소를 일관되게 분배합니다.
5. 항생제 선택
접시에 나타나는 항생제는 변화 후 접시에 생길 이동성 두드러기의 수에 영향을 미칩니다. 접시에 콜로니의 재배를 방지하기 위해 잘못된 항생제를 사용합니다. 너무 낮은 농도의 항생제를 사용하면 잔디밭에서 박테리아가 자랄 수 있습니다. 귀중한 박테리아 잔디는 고정과 관련된 층을 형성하는 접시를 통해 박테리아의 출현입니다.
PC가 느리게 실행되나요?
ASR Pro은 PC 수리 요구 사항을 위한 최고의 솔루션입니다! 다양한 Windows 문제를 신속하고 안전하게 진단 및 복구할 뿐만 아니라 시스템 성능을 향상시키고 메모리를 최적화하며 보안을 개선하고 최대 안정성을 위해 PC를 미세 조정합니다. 왜 기다려? 지금 시작하세요!
올바른 항생제를 사용하고 있는지 확인하려면 새로운 인간 플라스미드에서 선택 가능한 마커를 테스트하십시오. 선택 가능한 마커는 일반적으로 모든 항생제 중량 유전자입니다. 예를 들어, 자체 플라스미드에 암피실린 내성 유전자가 포함되어 있는 경우 플레이트에 암피실린을 사용하여 작동 중인 형질전환되지 않은 세포를 분류하십시오. 따라서 형질전환된 세포만이 판을 핍니다.
어떤 항생제를 사용하든 이 정제를 16시간 이상 배양하면 확실히 위성 식민지가 생길 수 있다는 점을 명심하십시오.
세균 변환 문제 해결 가이드
1. 변환 효율성과 Competent Cell 비교
실험 계산을 향해 제어판을 삽입하고 다음으로 변형을 사용합니다. 계산기를 사용하여 대략적인 수치를 생성할 수 있습니다. How To Solve The Problems Of Bacterial Transformation
So Lösen Sie Die Mit Der Bakteriellen Transformation Verbundenen Probleme
Hoe – De Problemen Van Bacteriële Transformatie Oplossen
Comment Résoudre La Difficulté De La Transformation Bactérienne
Come Prendersi Cura Dei Problemi Di Trasformazione Batterica
Como Resolver Os Problemas De Transformação Bacteriana
Hur Man Löser Problemen Relaterade Till Bakteriell Transformation
Как решить проблемы бактериальной трансформации
Jak Naprawić Problemy Transformacji Bakteryjnej
Cómo Solucionar Los Problemas De Transformación Bacteriana
년
