Jak Naprawić Problemy Transformacji Bakteryjnej

 

Oto kilka bardzo prostych kroków, które mogą pomóc rozwiązać problemy z transformacją drobnoustrojów.

Komputer działa wolno?

  • 1. Pobierz ASR Pro ze strony internetowej
  • 2. Zainstaluj go na swoim komputerze
  • 3. Uruchom skanowanie, aby znaleźć złośliwe oprogramowanie lub wirusy, które mogą czaić się w twoim systemie
  • Już dziś popraw szybkość swojego komputera, pobierając to oprogramowanie - rozwiąże ono problemy z komputerem.

    Etapy transformacji bakteryjnej Na pierwszy plan wysuwa się rozwój związany z umiejętnościami, wiązanie DNA z komórką, przetwarzanie i/lub pobieranie wolnego DNA (zwykle w określonym kierunku od 7′ do 5′) itp. Integracja DNA do naszego chromosomu poprzez rekombinację.

     

     

    Transformacja bakteryjna może być dobrze znanym procesem w laboratoriach biologii molekularnej. Po dostarczeniu informacji o reakcji ligacji z kompetentnie sparowaną strukturą komórkową Escherichia coli i wysianiu każdej komórki na szalkę, wystarczy poczekać, aż w końcu na najważniejszej płytce następnego dnia utworzy się duża liczba kolonii.

    Ale niezawodnie napotkasz typowe problemy ze swoim kubkiem, takie jak brak kolonii, kolonie nasycone lub zbyt wiele uli. Daje to kilka czynników, które przyczynią się do doskonałej transformacji bakteryjnej, a także kilka superszybkich informacji na temat rozwiązywania problemów, aby rozwiązać problemy po przebudowie.

    Jakie czynniki prawie zawsze wpływają na udaną transformację?

    Dlaczego prawdopodobnie moja wydajność transformacji jest tak niska?

    Czynnikami wpływającymi na poprawę wydolności są: szczep bakterii, faza wzrostu masy mięśniowej kolonii bakteryjnej, skład mieszanki transformacyjnej oraz wielkość i dolegliwość obcego DNA.

    1 Wydajność transformacji bakteryjnej kompetentnych komórek

    Kompetentne problemy komórki o niskiej wydajności transformacji tworzą niewiele, a także nie tworzą kolonii w miarę wzrostu łysinek. Aby obliczyć wydajność procesu konwersji, użyj nieprzeciętego plazmidu o powszechnie znanym stężeniu, takim jak pUC19, aby przekształcić silne komórki.

    Jak obliczyć wydajność konwersji

    Efektywność transformacji zawsze nie istnieje. jednostki tworzące kolonie otrzymane w wyniku przekształcenia 1 μg plazmidowego DNA do właściwej danej objętości bezwzględnej komórek kompetentnych.

    Jako przykład, potężny SR przekształcił 1 μl (10 pg na μl) pUC19 do 25 μl za chemicznie kompetentnymi komórkami GoldBio DH10B.

    Rozwiązywanie problemów ze zmianami bakteryjnymi

    Następnie dodano do probówki 975 μl odzysku rozsądnego. Rozcieńczyli 10 μl w stosunku do 990 μl ekstraktu i dozowali 400 μl rozcieńczonej pożywki.

    Następnego dnia wspomniałeś o 250 koloniach w stosie.

    • Kolonie = oferowane 250
    • μg DNA ma 0,00001 (lub 10 pg = 0,00001 μg).
    • Rozcieńczenie odpowiada X 10/1000 50/1000 równa się 0,0005

    Dla każdego małego plazmidu jako takiego, pUC19, 5,0 CFU / μg 10 dziesięć jest stosunkowo wysokim ET. Dlatego te profesjonalne komórki są bardzo wydajne.

    Aby uzyskać szczegółowe informacje na temat sposobu obliczania konwersji wydajności komórek wysokiej jakości, zobacz poniższy film GoldBio:

    Drugi plazmid

    Plazmid używany przez całą drogę transformacji może wpływać na skuteczność adaptacji. Na przykład, wydajność transformacji z wykorzystaniem dużej skuteczności plazmidowej jest również zwykle niższa niż wydajność charakteryzująca się tym małym plazmidem. W celu transformacji dowolnego ogromnego plazmidu, właściwy dobór kompetentnego materiału komórkowego, a tym samym technika elektroporacji, może pomóc w zwiększeniu wydajności transformacji.

    Innym czynnikiem do rozważenia jest porównanie stężenia DNA z zalecanym w protokole. W oparciu o opcję protokołu dla struktury komórkowej kompetentnej chemicznie GoldBio DH10B, zalecane ilości DNA do transformacji to od 1 pg do 100 ng DNA. Dlatego 1 μl reakcji ligacji jest wystarczającym powodem, aby przynajmniej 1 μg DNA mógł zostać użyty do transformacji tych komórek.

    Trzecie medium kulturowe

    Stransformowane bakterie wykorzystywały stopniowy szok zakresu ciepła lub częstotliwość impulsów elektrycznych, aby utworzyć chwilowe pory w swojej ścianie lub prawdopodobnie w samej ścianie. Dlatego mogą z łatwością „wyłapać” plazmidowy DNA. Aby wyzdrowieć z tej inwazji, komórki będą musiały żyć i rosnąć w bogatej w składniki odżywcze formie środowiska, jakim jest SOC.

    Więcej na ten temat to niesamowicie fantastyczne media, przeczytaj poniższy artykuł GoldBio.

    Krótkie podsumowanie środowiska SOC i środowiska potrzebnego do kompetentnej naprawy komórek

    Czwarta temperatura

    Temperatura odgrywa kluczową rolę w transformacji bakterii, a tak naprawdę w transformacji chemicznie profesjonalnych komórek.

    Na przykład, etap szoku cieplnego dla kompetentnych chemicznie komórek GoldBio DH10B wymaga stopniowego przetwarzania: inkubacja znaleziona w 0 ° C dla 30 wypożyczeń Trafone, a następnie inkubacja w 42 ° C dla drugiego tam 55 sekund i ponownie w 0 ° C, aby wyprodukować 2 minuty. Niewłaściwy krok w tej formie procesu może wpłynąć na wynik konwersji.

    Natychmiast po transformacji, transformowane komórki potrzebują dla Ciebie podgrzania do 37 ° C, aby mogły się rozwijać. Jednym ze sposobów na to jest użycie jakiegoś inkubatora z wytrząsaniem. Inkubator ten rozprowadza również składniki odżywcze w sposób trwały do ​​wszystkich komórek w pożywce.

    5. Wybór antybiotyków

    Antybiotyk będący częścią Twojej płytki wpływa na liczbę ruchomych uli, które rozwiną się na płytce po procesie konwersji. Stosowanie niewłaściwego antybiotyku w celu zapobiegania miareczkowaniu popularności kolonii na płytce. Zwykłe użycie antybiotyku w zbyt niskim stężeniu spowoduje, że bakterie będą się rozwijać na trawnikach. Istotnym trawnikiem bakteryjnym jest pojawienie się bakterii na płytce, które tworzą warstwę utrwalającą.

    Komputer działa wolno?

    ASR Pro to najlepsze rozwiązanie dla potrzeb naprawy komputera! Nie tylko szybko i bezpiecznie diagnozuje i naprawia różne problemy z systemem Windows, ale także zwiększa wydajność systemu, optymalizuje pamięć, poprawia bezpieczeństwo i dostraja komputer w celu uzyskania maksymalnej niezawodności. Więc po co czekać? Zacznij już dziś!


    Aby upewnić się, że używasz odpowiedniego antybiotyku, przetestuj marker selekcyjny na tym, że jest to po prostu ludzki plazmid. Markerem selekcyjnym jest zwykle gen o bardzo dużej masie antybiotykowej. Na przykład, jeśli prosty plazmid zawiera gen oporności na ampicylinę, przynieś ampicylinę na płytkę, aby uporządkować posiadane nieprzekształcone komórki. Dlatego na twoim talerzu kwitną tylko transformowane komórki.

    Bez względu na to, który antybiotyk zostanie użyty, należy pamiętać, że inkubacja tej tabletki przez 16 godzin może z pewnością spowodować wzrost kolonii satelitarnych.

    Przewodnik rozwiązywania problemów z transformacją bakterii

    1. Sprawdź wydajność transformacji w porównaniu z kompetentnymi komórkami

    rozwiązywanie problemów z transformacją bakteryjną

    Włóż płytkę kontrolną podczas obliczeń eksperymentu i użyj powyższej transformacji. Możesz skorzystać z naszego kalkulatora, aby uzyskać przybliżoną liczbę. Zapewnij wydajną transformację, korzystając z dostępnych na rynku kompetentnych komórek, takich jak How To Solve The Problems Of Bacterial Transformation
    So Lösen Sie Die Mit Der Bakteriellen Transformation Verbundenen Probleme
    Hoe – De Problemen Van Bacteriële Transformatie Oplossen
    Comment Résoudre La Difficulté De La Transformation Bactérienne
    Come Prendersi Cura Dei Problemi Di Trasformazione Batterica
    Como Resolver Os Problemas De Transformação Bacteriana
    박테리아 형질전환 문제 해결 방법
    Hur Man Löser Problemen Relaterade Till Bakteriell Transformation
    Как решить проблемы бактериальной трансформации
    Cómo Solucionar Los Problemas De Transformación Bacteriana