Устранение проблем бактериальной трансформации

Table of Contents

Вот несколько очень простых шагов, которые могут помочь вам решить проблемы трансформации микробов.

ПК работает медленно?

1. Загрузите ASR Pro с веб-сайта

2. Установите его на свой компьютер.

3. Запустите сканирование, чтобы найти вредоносные программы или вирусы, которые могут скрываться в вашей системе.

Улучшите скорость своего компьютера сегодня, загрузив это программное обеспечение - оно решит проблемы с вашим ПК. г.

Этапы бактериальной трансформации Развитие связано с навыками, связыванием ДНК с внешним слоем клетки, обработкой и / или поглощением свободной ДНК (обычно в определенном направлении от двух до трех ‘до 5’) и т. Д. Интеграция ДНК во все хромосомы путем рекомбинации.

Бактериальная трансформация может быть вероятным процессом в лабораториях молекулярной биологии. После прекращения реакции лигирования с компетентными парными клетками Escherichia coli и помещения каждой клетки в чашу, все, что вам нужно сделать, это дождаться точки, когда на следующий день на всей чашке образуется большое количество колоний.

Но вы все время будете сталкиваться с общими проблемами с вашей чашкой, например, с отсутствием колоний, насыщенными колониями или слишком большим количеством городов. Это дает вам несколько факторов, которые приведут к отличной бактериальной трансформации, и некоторую информацию по немедленному устранению неполадок для решения ваших проблем после преобразования.

Какие факторы почти всегда влияют на успешное преобразование?

Почему обычно моя эффективность преобразования такая низкая?

Факторами, влияющими на повышение эффективности, являются штамм бактерий, фаза роста бактериальной колонии, состав, связанный с трансформационной смесью, а также размер и острие чужеродной ДНК.

1 Эффективность бактериальной трансформации компетентных клеток

Компетентные невероятно маленькие клетки с низкой эффективностью трансформации образуют немногие, также известные как отсутствие колоний по мере роста бляшек. Чтобы рассчитать эффективность продажи, используйте неразрезанную плазмиду в часто известной концентрации, например pUC19, для трансформации эффективных клеток.

Как рассчитать эффективность конверсии

Очень мало эффективности трансформации. колониеобразующие единицы, полученные путем преобразования 1 мкг плазмидной ДНК в основной заданный абсолютный объем компетентных клеток.

В качестве 1 примера, мощный SR преобразовал 1 мкл (10 пг – мкл) pUC19 в 25 мкл всех химически компетентных клеток GoldBio DH10B.

Затем вы добавили в пробирку 975 мкл процесса восстановления. Они разбавили 10 мкл экстракта на 990 мкл и выделили 260 мкл разбавленной среды.

На следующий день вы упомянули в стопке 250 колоний.

Колонии = 250 человек на открытом воздухе.
1 мкг ДНК состоит из 0,00001 (или 10 пг = 0,00001 мкг).
Разведение соответствует X 10/1000 50/1000 равно 0,0005

Для каждой маленькой плазмиды как таковой pUC19, 5,0 КОЕ / мкг 10 ^десять, является относительно высоким значением ET. Следовательно, эти профессиональные ячейки очень эффективны.

Подробнее о том, как рассчитать это преобразование эффективности ваших хорошо обученных клеток, см. в видео GoldBio ниже:

2-я плазмида

Плазмида, используемая при трансформации, может влиять на эффективность адаптации. Например, эффективность трансформации с использованием обильной плазмиды также обычно ниже, чем эффективность, которую имеет эта небольшая плазмида. Чтобы трансформировать одну конкретную огромную плазмиду, правильный выбор компетентных солнечных элементов и, следовательно, метод электропорации могут помочь, что повысит эффективность трансформации.

Еще один фактор, о котором следует помнить, – это сравнение концентрации ДНК с концентрацией, одобренной вашим протоколом. Основываясь на типах протоколов для химически компетентной клеточной структуры GoldBio DH10B, рекомендуемые количества ДНК для трансформации могут составлять от 1 пг до 100 нг ДНК. Следовательно, 1 мкл реакции лигирования, состоящей как минимум из 1 мкг ДНК, может быть использован для трансформации этих клеток.

3-я питательная среда

Преобразованные бактерии использовали постепенный энергетический шок или частоту электрических импульсов для создания долговременных пор в своей стенке или, возможно, в основной стене. Следовательно, они могут легко «захватить» часть плазмидной ДНК. Чтобы оправиться от этого вторжения, клетки должны жить и расти в богатой питательными веществами среде, такой как SOC.

Подробнее об этом фантастическом СМИ читайте в статье GoldBio ниже.

Критика среды SOC и окружающей среды для получения компетентного ремонта клеток

4-я температура

Температура играет ключевую роль в трансформации бактерий, прежде всего в трансформации профессиональных химически клеток.

Например, этап теплового шока для химически компетентных клеток GoldBio DH10B требует постепенной обработки: инкубация при 0 ° C для 30 грилей Trafone, затем инкубация при 42 ° C в течение пятидесяти секунд и снова при 0 ° C в течение 2 минут. Неправильный шаг в этом варианте процесса может повлиять на результат преобразования.

Сразу после трансформации трансформированные клетки нуждаются в нагревании до 37 ° C для роста. Один из способов сделать это – использовать инкубатор со встряхиванием. Этот инкубатор также равномерно распределяет питательные вещества по всем клеткам питательной среды.

5. Выбор антибиотиков

Антибиотик на планшете влияет на количество передвижных ульев, которые разовьются на планшете после процесса преобразования. Использование неправильного антибиотика для предотвращения титрования колоний на планшете. Простое использование антибиотика в слишком низкой концентрации приведет к росту бактерий на ваших лужайках. Жизненно важный бактериальный газон – это появление на вашей тарелке бактерий, которые образуют слой фиксации.

ПК работает медленно?

ASR Pro — идеальное решение для ремонта вашего ПК! Он не только быстро и безопасно диагностирует и устраняет различные проблемы с Windows, но также повышает производительность системы, оптимизирует память, повышает безопасность и точно настраивает ваш компьютер для максимальной надежности. Так зачем ждать? Начните сегодня!

Чтобы убедиться, что вы используете правильный антибиотик, протестируйте селектируемый маркер на полной плазмиде человека. Выбираемый маркер – это обычно ген веса антибиотика. Например, если еще одна плазмида содержит ген устойчивости к ампициллину, создайте ампициллин в планшете, чтобы отсортировать ваши конкретные нетрансформированные клетки. Таким образом, на чашке высоко цветут только трансформированные клетки.

Какой бы антибиотик ни использовался, помните, что инкубация этого планшета дольше, чем 16 часов, безусловно, может вызвать рост спутниковых колоний.